摘要:目的:运用网络药理学方法探讨活络效灵丹治疗缺血性中风的作用机制。方法:利用中医药证候 关联数据库(SymMap)、中药综合资源数据库(TCM-ID)、草药成分和靶标数据库(HIT) 以及 SwissTargetPrediction数据库检索活络效灵丹的活性成分、作用靶点;通过人类基因综合数据库(GeneCards)、 比较毒理基因组学数据库(CTD)、基因组学数据库(DisGeNET)、基因表达综合数据库(GEO) 等筛查缺血 性中风的疾病靶点与差异表达基因;利用UpSetR对活络效灵丹作用靶点、差异表达基因和缺血性中风疾病靶 点取交集,筛选出活络效灵丹治疗缺血性中风相关靶点;通过Metascape 数据库对相关靶点进行基因本体 论(GO) 和京都基因和基因组百科全书(KEGG) 富集分析。利用Cytoscape 3.9.10软件构建蛋白质互作网络和 药物-活性成分-靶基因网络,筛选出活络效灵丹治疗缺血性中风的核心成分和核心靶点。通过单样本基因集 富集分析对GSE16561数据集中正常和缺血性中风样本间的免疫细胞浸润差异进行分析,并分析核心靶点与免 疫细胞浸润水平的相关性。采用分子对接验证核心靶点与活性成分的亲和性。结果:共获得活络效灵丹活性 成分226个,靶点1 541个,缺血性中风靶点712个,差异表达基因3 136个。取交集后,共获得活络效灵丹抗 缺血性中风靶点82个。GO富集分析发现,活络效灵丹治疗脑缺血性中风的靶点主要参与炎症反应、脂多糖反 应、细胞因子产生的正调节、激素反应和细胞迁移的正调节等生物过程。KEGG分析提示,活络效灵丹治疗缺 血性中风的作用机制与癌症通路、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt) 和白细胞介素(IL) -17信号通 路等有关。蛋白质互作网络和药物-活性成分-靶基因网络得到C-C基序趋化因子配体2(CCL2)、IL-1β和基 质金属蛋白酶9(MMP9) 等核心靶点和槲皮素、丹参酮ⅡA、白藜芦醇、姜黄素、丹酚酸、阿魏酸等10种核 心成分。Pearson相关性分析显示,IL-1β和MMP9与中性粒细胞、内皮细胞等免疫细胞浸润水平相关。分子对 接结果显示,IL-1β和MMP9与活络效灵丹核心成分结合稳定。结论:活络效灵丹中槲皮素、丹参酮ⅡA、白 藜芦醇、姜黄素、丹酚酸和阿魏酸等有效成分能够作用于IL-1β和MMP9等核心靶点,通过调控癌症通路、 PI3K/Akt和IL-17等信号通路治疗缺血性中风。